無塵室棚沉降菌測(cè)試規(guī)范安全操作規(guī)程

1、菌落：細(xì)菌檢查后，由一個(gè)或好多個(gè)細(xì)菌繁殖而產(chǎn)生的一病菌集落，通稱CFU。通常用數(shù)量表明。

2、測(cè)試方式：地基沉降法，即利用當(dāng)然地基沉降基本原理搜集在空氣中的微生物物體于培養(yǎng)基培養(yǎng)皿，經(jīng)48個(gè)小時(shí)以上塑造，在適合的標(biāo)準(zhǔn)下讓其繁衍到可以看到的菌落數(shù)，來鑒定清潔自然環(huán)境內(nèi)的活微生物菌種數(shù)，并借此來鑒定無塵室棚的潔凈度等級(jí)。

3、常用的儀器設(shè)備和機(jī)器設(shè)備

1）髙壓消毒鍋：應(yīng)用時(shí)參考文檔GZ-ZL-SOP-066-00開展實(shí)際操作。

2）恒溫培養(yǎng)箱：務(wù)必按時(shí)對(duì)培養(yǎng)箱的溫度表開展計(jì)量檢定。

3）培養(yǎng)皿：一般選用中90mm×15mm硼氯化鎂夾層玻璃培養(yǎng)皿。應(yīng)用前將培養(yǎng)皿放置121℃濕熱滅菌20分鐘。

4、培養(yǎng)基：一般營(yíng)養(yǎng)成分瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加溫融化，制冷至約45℃在無菌技術(shù)前提下將培養(yǎng)基引入培養(yǎng)皿，每皿約15m1。待瓊脂培養(yǎng)基凝結(jié)后，將培養(yǎng)基培養(yǎng)皿放進(jìn)30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中塑造數(shù)鐘頭，若培養(yǎng)基培養(yǎng)皿上確實(shí)沒有菌落生長(zhǎng)發(fā)育，就可以供取樣用，制取好的培養(yǎng)基培養(yǎng)皿應(yīng)在2～8℃的條件中儲(chǔ)放。

5、測(cè)試流程

1）取樣方式：將已制取好的培養(yǎng)皿置放在預(yù)先確定的抽樣點(diǎn)，開啟培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表層曝露0.5鐘頭，再將培養(yǎng)皿蓋緊蓋后顛倒。
2）塑造，時(shí)間不少于48鐘頭。每次培養(yǎng)基應(yīng)該有對(duì)比實(shí)驗(yàn)，查驗(yàn)培養(yǎng)基自身是不是環(huán)境污染，可每次選中3只培養(yǎng)皿作對(duì)比塑造。

3）菌落記數(shù)：用人眼立即記數(shù)，隨后用5～10倍高倍放大鏡查驗(yàn)，有無忽略。若培養(yǎng)皿上面有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重合，可辨別時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上的菌落記數(shù)。

6、常見問題

1）測(cè)試用品要做殺菌解決，以保證測(cè)試的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性。

2）采用一切對(duì)策避免 人為因素對(duì)樣版的環(huán)境污染。

3）對(duì)培養(yǎng)基、塑造標(biāo)準(zhǔn)以及他主要參數(shù)作詳盡的紀(jì)錄。

4）因?yàn)椴【贩N繁多，區(qū)別甚大，記數(shù)時(shí)一般用電子散射光于培養(yǎng)皿反面或正臉認(rèn)真觀察，不必漏計(jì)培養(yǎng)皿邊沿生長(zhǎng)發(fā)育的菌落，并須留意病菌菌落與培養(yǎng)基沉淀的棚別，必需時(shí)要高倍顯微鏡辨別。

5）取樣前要認(rèn)真仔細(xì)每一個(gè)培養(yǎng)皿的品質(zhì)，如發(fā)覺質(zhì)變、損壞或環(huán)境污染的應(yīng)去除。

7、測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)

1）測(cè)試情況

（1）沉降菌測(cè)試前：被測(cè)試無塵室棚（棚）的溫濕度記錄須做到要求的規(guī)定，負(fù)壓差、務(wù)必操縱在標(biāo)準(zhǔn)值內(nèi)。被測(cè)試無塵室棚（棚）已消毒。

（2）測(cè)試情況有靜止和信息二種，并在匯報(bào)中標(biāo)明測(cè)試情況。

（3）測(cè)試工作人員：測(cè)試人員務(wù)必配戴合乎自然環(huán)境潔凈度等級(jí)等級(jí)的工作服裝。靜態(tài)數(shù)據(jù)測(cè)試時(shí)，棚里測(cè)試工作人員不可超過2本人。

2）測(cè)試時(shí)間

（1）對(duì)單邊流，如100級(jí)凈化處理棚間內(nèi)及層.流操作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在空調(diào)凈化系統(tǒng)軟件正常的運(yùn)作不少于10分鐘后逐漸。

（2）對(duì)非單方面流，如10000級(jí)、100000級(jí)以上的凈化處理棚間，測(cè)試應(yīng)在空調(diào)凈化系統(tǒng)軟件正常的運(yùn)作不少于30分鐘逐漸。

8沉降菌記數(shù)
1）至少取樣點(diǎn)數(shù)量：可按表1明確。在達(dá)到至少測(cè)等級(jí)的與此同時(shí)，還宜達(dá)到至少培養(yǎng)皿數(shù)，見表2。  表1最少取樣點(diǎn)數(shù)量

注：表格中的總面積針對(duì)單邊流無塵室棚就是指排風(fēng)總面積，針對(duì)非單方面流無塵室棚就是指棚間總面積。         表2至少培養(yǎng)皿數(shù)

2）取樣點(diǎn)的布局：工作中棚測(cè)試點(diǎn)部位距地0.8～1.5m上下（稍高于工作臺(tái)面）?？稍谥饕O(shè)備或重要工作中主題活動(dòng)范疇處提升測(cè)量點(diǎn)，取樣點(diǎn)的安排應(yīng)務(wù)求勻稱，防止取樣點(diǎn)在某 部分棚域過度集中化，某部分棚域過度稀少。

3）紀(jì)錄：測(cè)試匯報(bào)中應(yīng)紀(jì)錄棚間溫度、空氣濕度、壓力差、測(cè)試情況及測(cè)試數(shù)據(jù)信息。

4）結(jié)果測(cè)算：用記數(shù)方式得到每個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。均值菌落數(shù)的測(cè)算見上式：m1 m2 …… mn

均值菌落數(shù)m=n

式中：m為平均菌落數(shù)；m1為1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；m2為2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn為n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n為培養(yǎng)皿數(shù)量。

5）結(jié)果鑒定：用均值菌落數(shù)分辨無塵室棚的空氣中的微生物菌種。

6）無塵室棚（棚）內(nèi)的均值菌落數(shù)務(wù)必小于所選中的標(biāo)準(zhǔn)（見表3）。                    表3

7）若某無塵室棚（棚）的均值菌落數(shù)超出標(biāo)準(zhǔn)，則務(wù)必對(duì)于此事棚域優(yōu)先消毒殺菌，隨后再次測(cè)試2次，測(cè)試結(jié)果務(wù)必達(dá)標(biāo)。

關(guān)鍵論文參考文獻(xiàn)：國(guó)家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)GB/T 16294-1996